注意:实验中使用的裂解液为6*,即细胞样品体积:裂解液体积=5:1,当样品细胞数量较少(1-10个)时,细胞体积不得超过5μl,即细胞样本与裂解液体积之和为6μl。
1样品处理1、实验开始前准备好干冰
2、细胞样品必需尽可能去除培养基,酶等可能存在的杂质。细胞样品以5-10μl PBS(RNAse FREE)重悬(样品体积尽量保证在5-10μl这个范围,过大的样品体积会造成单位体积细胞量减少,影响后续实验效果)3、转移样品至2ml 螺口离心管(RNAse FREE)中4、按照细胞样品体积:裂解液体积=5:1的比例加入6*裂解液(不需要混匀,注意样品+裂解液总体积不要超过33μl,即样品体积不超过27.5μl,当样品细胞数量较少(1-10个)时,细胞体积不得超过5ul,即细胞样本与裂解液体积之和为6μl。),拧紧管盖,迅速置于干冰上冷冻(注意,每一个样品加进裂解液后,立即置于干冰上,再操作下一个样品,该步骤完成后直至样品进行扩增实验前,样品必须始终处于冷冻状态)根据需要,-80储存或者干冰运输。5、包装样品,干冰寄送。2样品包装和寄送1、实验中使用和用于运输的2ml 螺口离心管见下图,尽量使用螺纹口冻存管: 2、为防止混淆样品管盖和管壁均要书写编号,如下图:3、剪下约0.5-1cm宽度 parafilm 封口膜,如下图:
4、剪下的parafilm分两部分,白底蓝纹的为保护蜡纸,半透明状态的为要使用的parafilm 封口膜,如下图:5、将parafilm膜紧紧缠在离心管盖和管身的接合处 如下图:
注意:为保持样品处于冷冻状态,该步骤尽量在干冰上进行,建议将管下半部分插进干冰中,漏出上半部分进行缠膜操作,但是在低温环境下,parafilm膜延展性会变弱,如果发生断裂等情况,可以再多剪几条膜进行包缠。6、将样品放入样品盒 如下图7、盖上盒盖,纵横勒上2条橡皮筋,如下 8、将样品盒放入塑料袋中,如下图
9、将塑料袋叠合,缠紧,如下图
10、用宽透明胶带纵横双向缠好,如下图
注意:为保持样品处于冷冻状态,以上步骤尽量在干冰上进行,样品盒可先在干冰上预冷。11、样品盒放入装有适量干冰泡沫箱中,在样品提交单上填好样品详细信息(编号等信息必须严格与样品管上一致),将填好的样品单以塑料袋装好后一起放进泡沫盒中。顺丰快递运输。请注意:(1)根据运输时间,2-3天路程约需要10公斤干冰。(2)不要使用大块状干冰,否则运输过程中自重比较大的块状干冰可能会在箱内挤压样品盒,移动中可能造成样品盒破裂。如果只有大块状干冰可以使用,那么装箱时先砸碎成小块。(3)选择合适大小,且箱壁较厚的泡沫箱,并在泡沫箱外纵横方向都缠上透明胶,最好是将泡沫箱外壁用胶带覆盖一遍,带防止运输途中因挤压和抛掷而破裂。(4)泡沫箱全部缠上胶带后,为防止密封过紧,气密性过强,干冰挥发产生过大压力而造成泡沫箱爆裂,用美工刀或其他薄刃刀具,将缠在泡沫盒盖和箱体接合处的胶带刺破一个1-2厘米的小缝隙,以在气压过高时排出气体。 相关阅读
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